B族链球菌（GBS）荧光PCR核酸扩增检测试剂盒

B族链球菌(GBS)荧光PCR核酸扩增检测试剂盒说明书

【产品名称】

通用名称：B 族链球菌 (GBS)核酸扩增检测试剂盒(PCR 荧光探针法)

Name ：Diagnostic Kit for Group B streptococcus DNA （PCR Fluorescence Probing）

【包装规格】48T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测全血等样本中的 B 族链球菌，用于 B 族链球菌感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用一对 B 族链球菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR技术对 B 族链球菌的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性

对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂 GBS 反应液 酶液

用量（样本数为 N） 20μl 1μl

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μl，分别加入相应的反

应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

【储存条件和有效期】

试剂盒保存于-20±5℃，有效期 12 个月；避免反复冻融，冻融次数不超过 5 次；试剂开瓶后，在室温条件下放置时间不应超过 8 小时；运输采用干冰（或者冰袋）保持低温，运输时间不应超过 4 天。试剂盒生产日期见产品标签。

【标本要求】

标本采集：用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管

保存运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6208个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

取抗凝血下层血细胞 50uL，加入 100uL 双蒸水吹匀

1.2DNA 提取

1) 对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液（固体标本加入50uL核酸提取液），100℃恒温处理 10 分钟，13,000 rpm 离心 5 分钟，取上清液转移至新的 1.5mlEP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用南昌垒佳数码科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出

现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围

内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上

下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

5.2结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道 35.0<Ct 值≤37，建议重复检测，如果检测通道仍为 35.0<Ct

值≤37，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果 Ct 值>37 或无 Ct 值。

6. 检测方法的局限性

1）样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

2）样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

3）阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

4）病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

5）不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

6）试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

7）本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

7. 质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32；

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

8. 产品性能指标

阴阳性参考品符合率：8 份阳性参考品符合率为 100％；10 份阴性参考品符合

率为 100％。

低检测限：2.0×102copies/ml。

精密度：批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数（CV）均≤3%。

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行；

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，*混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

公司优势：
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2）价格：价格实惠，量大从优。
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