流感嗜血杆菌（Hi）荧光PCR核酸检测试剂盒

流感嗜血杆菌(Hi)荧光PCR核酸检测试剂盒​

流感嗜血杆菌的一种疾病，该病感染可能表现亚临床症状，伴有较低的死亡率和产蛋率下降，会引起肝脾肿大综合征和大肝大脾病等，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本产品基于PCR原理开发。它具有下列特点：

一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
根据流感嗜血杆菌的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
基于染料法qRT-PCR检测，灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍，可以达到至少1000拷贝/反应。
使用一管式qRT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
本产品足够50次30μL体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。

成  份                                                         十孔盒包装

2×qRT-PCR 缓冲液                                  500 μL（棕色管）

10×qRT-PCR酶混合液                               100 μL（红盖）

 ROX染料I                                                 50 μL（棕色管）

ROX染料II                                                  50 μL（棕色管）

荧光PCR模板稀释液                             1mL（亮黄盖）

流感嗜血杆菌RT-PCR引物混合液              100 μL（白盖）

流感嗜血杆菌​RT-PCR阳性对照

（1×10E8拷贝/μL）                                     50 μL（黄盖）

核酸释放剂试用装                               20次（1mL，绿盖）

低温运输，-20℃保存，保存期限为88个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供DNA段作为阳性对照。

成分                   N+534个制备所得样品            RT-PCR阴性对照             RT-PCR阳性对照（2-7管）

2×qRT-PCR               10μL                                     10μL                               各10μL

缓冲液

口蹄疫病毒RT-PCR      2μL                                        2μL                               各2μL

引物混合物

50×ROX (见注)           0.4μL                                      0.4μL                             各0.4μL

样品制备所得RNA模板    5.6μL                                   不加                                不加

（来于第8步）

稀释所得548个阳性对照       不加                                    不加                         各5.6μL（2号样到2

（来于第6步）                                                                                           号管，3号样到3号管…）

10×qRT-PCR                   2μL                                      2μL                                 2μL

酶混合液

注:需使用ROX染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。

需使用ROX染料II的机型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。

不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System， LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene 3000、RotorGene 6000。

上机后按下面参数进行RT-PCR（参数可能会因仪器不同而需优化）。

如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。

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